临床基因扩增实验又称PCR实验,近年来对这类实验室的建设越来越得到重视,因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。
01.PCR实验室的平面设计布局
标准的PCR实验室分为四个单独的区域:
① 试剂储存和准备区
② 标本制备区
③ 扩增区
④ 扩增产物分析区
为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从【试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区】。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR实验室设计的“16字口诀”
(1) 各区独立;(2) 注意风向;
(3) 因地制宜;(4) 方便工作。
02.PCR实验室的设计原则
原则上应当设置4个区域:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。但根据使用仪器的功能,区域可适当合并。使用实时荧光PCR仪,扩增区、扩增产物分析区可合并。
各区功能必备物品清单:
① 试剂存储和准备区(1区)
功能:移动式实验室配备三个主实验室及缓冲,满足核酸检测流程诉求,具高灵贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
必备物品:
(1) 2~8℃和-20℃以下冰箱
(2) 混匀器
(3) 微量加样器(覆盖0.2-1000µl)
② 标本制备区(2区)
功能:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
必备物品:
(1) 2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱
(2) 高速离心机
(3) 混匀器
(4) 水浴箱或加热模块
(5) 微量加样器(覆盖0.2-1000µl)
(6) 生物安全柜
③ 扩增区(3区)
功能:cDNA合成、DNA扩增及检测。
必备物品:
核酸扩增仪(或荧光定量PCR仪)
④ 扩增产物分析区(4区)
多数猪场及屠宰场不需要此分区
功能:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
必备物品:
(1) 杂交仪、电泳仪、测序仪等
(2) 微量加样器(覆盖0.2-1000µl)
# 通用物品(4个区都可能需要)
(1) 可移动紫外灯(近工作台面)。
(2) 消耗品:一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头。
(3) 专用工作服和工作鞋(套)。
(4) 专用办公用品。
(5) 样本管架(2区)
(6) 防爆夹(2区)
(7) PCR管架(2区、传递窗)
(8) 其他物品
03.PCR实验室工作基本原则
(1) 进入各工作区域应当严格按照单一方向进行。【试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区】
(2) 各工作区域必须有明确的标记,不同工作区域内的设备、物品不得混用。
(3) 不同的工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。
(4) 实验室的清洁应当按【试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区】的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
(5) 工作结束后,必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键,因此可使用可移动紫外灯(254nm波长),在工作完成后调至实验台上60~90cm内照射。当PCR扩增产物仅几百或几十碱基对(bp),对紫外线损伤不敏感。
(6) 实验室的安全工作制度或安全标准操作程序,所有操作符合《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008)。
04.注意事项
① 试剂存储和准备区
贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区,不能经过扩增检测区,试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区,应当保存在标本处理区。
② 标本制备区
由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染,可通过在本区内设立正压条件,避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,必须在生物安全柜内开盖,并有明确的样本处理和灭活程序。
③ 扩增区
为避免气溶胶所致的污染,应当尽量减少在本区内的走动。必须注意的是,所有经过检测的反应管不得在此区域打开。
④ 其他
枪头及离心管需经高温灭菌处理。
总部座机:028-61037888
联系电话:182-1563-7202
地址:成都市郫都区德源镇(菁蓉镇)展望东路51号2楼1号